小鼠全血提了 RNA，溶于水之后能在-80 放多久？做建库，rin 值不降低？

如果是已经纯化好的小鼠全血总 RNA，最后溶在 RNase-free 水里并放 −80°C，一般可以保存较久；真正影响 RIN 的往往不是“放了几个月”，而是RNase 污染、反复冻融、样本本身残留盐/金属离子和保存前已有降解。我查一下几个常用建库/质控厂商的建议，给你一个更实用的时间范围。

可以。已经提纯、溶在 RNase-free water 里的小鼠全血总 RNA，−80°C 保存用于后续建库，保守地按 1 年以内使用是比较稳妥的。 Illumina 对 RNA 建库样品的官方建议就是：RNA 可溶在 RNase-free water 或 TE 中，在约 −80°C（−85～−65°C）保存 最长 1 年，同时避免多次冻融。Thermo Fisher 也给出类似建议，认为 RNA 在 −80°C 一般可稳定保存约 1 年。(support-docs.illumina.com www.thermofisher.com)

但“RIN 完全不降低”没法保证。保存得好的情况下，几周到几个月通常不会因为单纯 −80°C 储存而出现明显 RIN 下降；真正更容易让 RIN 掉的是反复冻融、RNase 污染，以及残留的 Mg²⁺ 等二价离子促进 RNA 水解。QIAGEN 也明确建议纯化 RNA 分装后低温长期保存，减少冻融次数。(www.qiagen.com www.qiagen.com)

如果你的目标是之后做 bulk RNA-seq，我会这样安排：

最重要的是现在就分装。比如一管作为最终建库用，一管专门用来测 Qubit/Nanodrop/RIN。这样以后测 RIN 时不会为了取 1–2 µL 把整管 RNA 反复冻融。Illumina 也明确建议需要重复使用时做 single-use aliquot。(support-docs.illumina.com knowledge.illumina.com)

如果你现在已经溶在普通 nuclease-free water里，没必要为了保存重新换 buffer，直接 −80°C 就可以。若是非常长期保存，Thermo Fisher 提到极低浓度 EDTA（如 0.1 mM）有助于螯合二价离子、减少 RNA 断裂，但如果马上要做建库，我一般不会为了这个再折腾一次 RNA。(www.thermofisher.com)

至于建库需要多少 RIN，要看你的方案。如果是常规 poly(A) mRNA-seq，最好保持 RIN ≥8；Illumina 对经典 mRNA workflow 也推荐至少约 8，因为降解的 RNA 容易出现 3′ bias。(knowledge.illumina.com knowledge.illumina.com) 如果是 total RNA / rRNA depletion，有些方案可以接受明显更低的 RIN，例如 Illumina Stranded Total RNA 对低质量 RNA 有专门的输入范围。(support-docs.illumina.com)

所以，如果你这批小鼠全血 RNA 现在 RIN 比如 8.5–10，分装后直接 −80°C，3–6 个月后再建库，我基本不会担心因为储存本身导致 RIN 明显下降。 1 年以内也属于厂家推荐的保存范围。

如果你告诉我你现在的 RIN、大概浓度（ng/µL）、准备做 polyA 还是 total RNA 建库，以及预计几个月后建库，我可以直接告诉你这批样品怎么分装最合适。